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谈生物分配胶束色谱法同时测定清火栀麦片中3 种有效成分

来源:[db:来源] 编辑:admin 时间:2017-09-05
  使用浓度高于临界胶束浓度(criticalmicellarconcentration,CMC)的表面活性剂溶液为流动相的反相液相色谱称为胶束液相色谱(micellar liquidchromatography,MLC)。生物分配胶束色谱(biopartitioning micellar chromatography,BMC)是使用由C18 反相固定相与非离子表面活性剂聚氧乙烯(23)十二烷基醚[polyoxyethylene(23)lauryl ether,Brij35],在类似生理环境的pH 及离子强度下形成的胶束作流动相组成的生物分配色谱系统。基于BMC 系统与生物屏障和细胞外液有着极为相似的特征,主要用来模拟生物膜和评价药物跨膜转运。前人的工作主要着重于由BMC 系统得到的色谱保留参数用于复杂体系(如中药等)的活性成分筛选和分离、预测药物口服吸收、药物在体内的生物活性及高通量体外筛选模型的建立等。本课题组在研究生物分配胶束色谱法预测多种中药成分口服吸收率时,发现既可以利用色谱系统得到的保留参数建立药物定量保留与其他参数,如膜通透性、活性、定量结构保留之间的关系模型,也可以发挥普通液相色谱分离分析功能。本文建立了生物分配胶束色谱法同时测定中成药中多种有效成分的含量。清火栀麦片是由穿心莲、栀子、麦冬3 味中药组成的成方制剂,具有清热解毒、凉血消肿的功能,用于咽喉肿痛、发热、牙痛、目赤。制剂中主要活性成分栀子苷、穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量的测定方法,中国药典2010 年版采用HPLC 法分别进行测定,还有较多文献报道用HPLC 法同时测定2 种活性成分的含量,这些方法烦琐、费时。蓝晓玉和林华采用HPLC 法梯度洗脱同时测定清火栀麦片中3 种活性成分的含量,梯度洗脱平衡时间相对较长,基线漂移,还需同时使用甲醇和乙腈2 种有机溶剂做流动相,不环保。
  生物分配胶束色谱法通过表面活性剂Brij35 形成胶束独特的两亲性,使其在传统的反相色谱上提供了类似生物膜的疏水、亲水、氢键、空间和静电等多种分子间作用力。由栀子苷、穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯结构可以看出,它们具有不同数目的羟基、不饱和键以及不同的空间结构,因此,在普通的C18 反相柱上通过生物分配胶束色谱法进行分离分析具有可行性。本文用生物分配胶束色谱法测定清火栀麦片中栀子苷、穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯3 种活性成分的含量,不需使用有机溶剂作为流动相,操作简单,重复性好,为该制剂质量标准研究提供了新的思路和方法。
  1  仪器与试药
  依利特高效液相色谱仪(DAD 检测器、QM QT-330 柱温箱),FA2104 电子天平,pH211 酸度计,KQ5200 DE 型数控超声波清洗器,美国密里博Milli-Q超纯水仪。甲醇(美国Merck 公司)为色谱纯,聚氧乙烯月桂醚为高纯级,磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、乙醚、氯化钠、磷酸、氢氧化钠为分析纯;栀子苷、穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的对照品(中国食品药品检定研究院)批号为110749-200714、110797-201108,110854-201007;清火栀麦片(广西日田药业集团有限责任公司),每片0.45 g,每盒24 片,批号110601、111105、120107。


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