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松龄血脉康胶囊对自发性高血压大鼠RAAS系统的调控机制讨论

来源:[db:来源] 编辑:admin 时间:2017-09-07
  高血压的发病机制复杂,其中肾素-血管紧张素-醛固酮系统(renin-angiotensin-aldosterone system,RAAS)是调节血压的重要途径之一。目前降压药物的开发研究也多是围绕RAAS展开。根据临床经验和以往的基础研究,松龄血脉康胶囊具有一定的降压作用。因此本研究就松龄血脉康胶囊对自发性高血压大鼠的降压效果和对RAAS的调节作用进行研究,为今后临床用药及相关研究提供一定的实验依据和理论参考。
  材料
  1. 动物
  10周龄SPF级雄性自发性高血压大鼠(spontaneouslyhypertensive rat,SHR)24只,体质量(250±20)g,购自北京维通利华实验动物技术有限公司,许可证号:SCXK(京)2007-0001,饲养于室内通风橱内,恒温(22±2)℃,自然昼夜,自由取食及饮水。
  2. 药品和试剂
  雷米普利(5mg/片)由赛诺菲安万特(北京)制药有限公司生产,批号:C0001;松龄血脉康胶囊(0.5g/粒,含葛根、珍珠层粉等)由成都康弘制药有限公司生产,批号:100513。血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)、醛固酮(aldosterone,ALD)放射免疫试剂盒购自北京北方生物技术研究所;实时定量PCR试剂均购自天津市灏洋生物制品科技有限公司,引物由上海生物工程有限公司合成。
  3. 主要仪器
  无创鼠尾压测量仪(BP 98AWU,日本软隆);GC-911型γ-放射免疫计数器(中国科学技术大学科技实业总公司);DY89-1实时定量PCR仪-Linegene 9620(BIOER);PCR仪-杭州博日科技有限公司TC-96/g/h(b)。
  方法
  1. 分组 SHR大鼠24只,平衡血压2周后随机分为3组(空白组、中药组、西药组),每组8只。各鼠每日相同时间灌胃给药1次,其中中药组每天以松龄血脉康胶囊20mg/kg灌胃;西药组每天予以雷米普利1mg/kg灌胃,空白组给予同体积的0.9%氯化钠溶液灌胃,连续4周。
  2. 检测指标
  2.1 血压测定 采用尾动脉无创测压法。在干燥、通风、安静的环境中将大鼠置于37℃恒温袋内预热10min,使大鼠尾动脉充分扩张,将传感器套在鼠尾根部,待大鼠短暂躁动停止后,连续测定3次取平均值作为血压。
  2.2 血浆AngⅡ、ALD含量测定取大鼠腹主动脉血,快速加入含有肝素的离心管中,颠倒混匀,4℃、3 000r/min离心5min,取上清液,参照ALD和AngⅡ测定试剂盒说明书,进行放射免疫分析测定。
  2 . 3 肝脏血管紧张素转化酶(a n g io t en si n - c o nver t i n genzyme,ACE)、血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensin Ⅱ type 1recepto,AT1R)mRNA表达量测定大鼠腹主动脉取血后,取肝脏使用Trizol试剂提取总mRNA,引物序列见表1。取总RNA 1μg,按照说明书进行逆转录合成cDNA。荧光定量PCR反应条件为:95℃,15min;95℃,20s;AT1R 57℃,ACE54℃,20s;40个循环,反应体系为20μL。选取15-25个扩增循环数(cycle threshold,Ct)的荧光信号,计算3个平行复孔的扩增效率,计算ΔCt(=Ct目的基因-Ct内参基因)和ΔΔCt[=(Ct实验组目的基因-Ct实验组内参基因)-(Ct对照组目的基因-Ct对照组内参基因)],并计算实验组目的基因与对照组目的基因的差异表达量2-ΔΔCt(=实验组目的基因/对照组目的基因)。


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